Domande frequenti(Domande frequenti)
1.D: Perché i colori sono accostati tra loro?
UN:La diafonia e altri problemi nell'imaging multiplex possono essere influenzati da diversi
fattori:
UN.Larghezza di banda del filtro dell'apparecchiatura di imaging:
Il crosstalk può essere correlato alla larghezza di banda dei filtri utilizzati nel sistema di imaging. Si consiglia di utilizzare filtri con larghezze di banda di lunghezza d'onda strette per ridurre al minimo la sovrapposizione spettrale e migliorare la separazione del segnale.
B.Eluizione incompleta degli anticorpi precedenti:
Per anticorpi ad alta affinità, come CK (citocheratina), può verificarsi un'eluizione incompleta se la fase di lavaggio è insufficiente. In tali casi, potrebbe essere necessario estendere le condizioni di eluizione (ad esempio, aumentando la temperatura o il tempo di incubazione) per garantire la completa rimozione dell'anticorpo precedente.
C.Squilibrio del segnale:
Il crosstalk può anche derivare da uno squilibrio nell'intensità del segnale tra canali adiacenti. Se un colorante ha un segnale molto più forte di un altro, il segnale più forte potrebbe riversarsi nel canale adiacente, dando origine a segnali falsi o indesiderati. Un'attenta ottimizzazione delle concentrazioni di anticorpi e delle impostazioni di imaging può aiutare a minimizzare questo effetto.
D.Altre possibili cause:
Altri fattori che contribuiscono al crosstalk possono includere scambi di anticorpi, lavaggi o eluizioni impropri tra i round o problemi con il recupero dell'antigene. La verifica attenta di ogni passaggio assicura un flusso di lavoro corretto e riduce la probabilità di errori.
Tenendo conto di questi fattori, è possibile ottimizzare i risultati delle immagini multiplex e ridurre al minimo le interferenze tra canali.
2.D: Come posso ottimizzare il rapporto di diluizione del colorante fluorescente TYR-xxxPlus e del tampone TSA?
UN:Questo kit mostra una sensibilità relativamente elevata, essendo da 10 a 50 volte più sensibile dei kit TSA convenzionali. È importante monitorare l'intensità del segnale per evitare una forza eccessiva. Se il segnale è troppo forte, considerare di ridurre la concentrazione del colorante, il tempo di reazione o la concentrazione dell'anticorpo primario. Al contrario, se il segnale è troppo debole, è possibile aumentare la concentrazione del colorante, il tempo di reazione o la concentrazione dell'anticorpo primario. La caratteristica unica di questo kit è che concentrazioni di colorante più elevate portano a un miglioramento esponenziale del segnale. Una diluizione di 1:50 produce il segnale più forte, mentre una diluizione di 1:500 è paragonabile al segnale del TSA convenzionale. Pertanto, la diluizione ottimale per la massima forza del segnale è 1:50, con 1:500 corrispondente al segnale TSA convenzionale.
3.D: Come faccio a scegliere il metodo di riparazione dell'antigene o il metodo di eluizione dell'anticorpo più appropriato?
A: Si raccomanda il primo ciclo di riparazione dell'antigene per posizionare l' sezioniin soluzione di riparazione dell'antigene EDTA a 95 ℃ con un valore di pH di 9,0 per 15-25 minuti; al secondo o più round di eluizione dell'anticorpo, si consiglia di posizionare il sezioniin soluzione di riparazione dell'antigene con acido citrico a 95 ℃ con un valore di pH di 6,0 per 25 min-40 min, per alcuni tessuti che cadono facilmente dalla fetta, l'eluizione dell'anticorpo può essere utilizzata nella soluzione di eluizione dell'anticorpo (venduta dalla nostra azienda.): per alcuni tessuti che cadono facilmente, può essere utilizzata l'eluizione dell'anticorpo (vendiamo: eluente anticorpale speciale mIHC, n. articolo: RC-010), un tempo di elusione dell'anticorpo troppo lungo può portare a una diminuzione del riconoscimento dell'antigene / colorazione nucleare debole DAPI, prestare attenzione a controllare il tempo di elusione dell'anticorpo (generalmente temperatura ambiente o 37 ℃ 5-15 min, 1-2 volte possono essere risultati più soddisfacenti).
4.D: I coloranti devono essere protetti dalla luce?
R: I coloranti fluorescenti contenuti in questo kit sono altamente resistenti allo spegnimento e non necessitano di essere schermati dalla luce sotto lampade fluorescenti durante l'intero processo, né di essere utilizzati in ambienti bui durante l'uso, ma non devono essere irradiati dalla luce solare.
5.D: Come scegliere l'ordine degli indicatori/anticorpi quando si effettua un'etichettatura multipla?
A: Gli anticorpi difficili da eluire devono essere posizionati nell'ultimo round, altrimenti è facile infilare i colori e gli indicatori più difficili devono essere posizionati nei round precedenti (ad esempio foxp3) e il primo round è solitamente per fare gli indicatori adatti alla riparazione EDTA 9.0; secondo l'esperienza della nostra azienda, il primo round è solitamente per usare il metodo del bagno d'acqua EDTA 9.0/metodo ad alta pressione dell'acido citrico 6.0 e il secondo round e quelli sopra sono solitamente per usare il metodo ad alta pressione dell'acido citrico 6.0 e si suggerisce che i multi-anticorpi usino il metodo ad alta pressione dell'acido citrico 6.0. Il metodo dell'autoclave dell'acido citrico 6.0 è raccomandato per tutti i multi-anticorpi.
6.D: Perché a volte si verifica la non specificità e come si può migliorare questa situazione?
A: La non specificità può derivare da diversi fattori:
Anticorpi policlonali: Questi anticorpi sono più inclini al legame non specifico. Per migliorare la specificità, si può prendere in considerazione il passaggio a un anticorpo monoclonale o la riduzione della concentrazione e dell'intensità del processo di riparazione dell'antigene.
Amplificazione eccessiva del segnale: Se l'amplificazione del segnale è troppo forte, può portare a una colorazione non specifica. Ridurre il tempo di reazione o la concentrazione della soluzione colorante può aiutare ad attenuare questo problema.
Alta concentrazione di anticorpo primario:Anche l'utilizzo di una concentrazione troppo elevata può contribuire alla non specificità. Per migliorare i risultati, utilizzare un rapporto di diluizione inferiore dell'anticorpo primario o diminuire l'intensità di riparazione regolando la temperatura, la durata o il pH della soluzione di riparazione.
Tenendo conto di questi fattori, è possibile migliorare la specificità della colorazione.
7.D: Come faccio a scegliere gli anticorpi per mIHC delle sezioni di paraffina?
R: Per risultati ottimali, si raccomanda di utilizzare anticorpi monoclonali ogniqualvolta possibile. Selezionare anticorpi specificamente progettati per immunoistochimica (IHC), immunoistochimica multiplex (mIHC) o IHC su sezioni incluse in paraffina (IHC-P). Inoltre, dare priorità agli anticorpi che sono stati convalidati tramite esperimenti knockout, poiché ciò fornisce una maggiore garanzia della loro specificità e affidabilità.
8.D: Quali vantaggi ha questo kit rispetto ad altri kit importati o nazionali?
A: Rapporto costo-efficacia: Il nostro kit offre un valore eccezionale, con prezzi che variano tra 2.000 e 10.000, a differenza di altri marchi che spesso superano i 10.000.
Stabilità: Questo kit dimostra un'eccellente stabilità. Anche se conservato accidentalmente a temperatura ambiente per un massimo di un mese, la sensibilità del segnale di rilevamento rimane inalterata. Sviluppato da HuilanBio, questo kit utilizza le ultime formulazioni, incorporando vari agenti protettivi, conservanti e H2IL2stabilizzatori per migliorarne significativamente la stabilità.
Sensibilità ultra elevata: Il nostro kit garantisce una sensibilità senza pari, raggiungendo livelli di prestazioni da 10 a 50 volte superiori a quelli dei prodotti concorrenti presenti sul mercato.
