Prinzipielle Einführung:
Das Prinzip der Multiplex-Immunhistochemie (mIHC) besteht darin, dass das Antigen auf Gewebeschnitten spezifisch an den primären Antikörper bindet. Anschließend wird ein mit Meerrettichperoxidase (HRP) konjugierter sekundärer Antikörper hinzugefügt, der an den primären Antikörper bindet. Nach Zugabe des Tyramin-Fluoreszenzsubstrats Non-aktivierte Tyramin-Fluorescein-Substrate werden durch HRP-katalysiertes Wasserstoffperoxid aktiviert. Nach Zugabe eines Fluoresceinsubstrats wird das nicht aktivierte Tyramin-Fluoresceinsubstrat durch HRP in Gegenwart von Wasserstoffperoxid katalytisch aktiviert. Das aktivierte Substrat bindet kovalent an nahe gelegene Proteinreste, einschließlich Tryptophan, Histidin und Tyrosin, wodurch eine stabile Antigen-Fluorescein-Bindung ermöglicht wird.
Bei Multiplex-Markierungsexperimenten können die nicht kovalent gebundenen primären und sekundären Antikörper aus der vorherigen Runde mithilfe von Hitzereparatur oder einem Antikörpereluenten weggespült werden. Anschließend wird die nächste Runde primärer HRP-sekundärer Antikörper inkubiert, gefolgt von der Anwendung eines anderen Tyrosinfluoresceinsubstrats. Dieser Vorgang kann wiederholt werden, um mehrere Markierungsschritte durchzuführen. Da in jedem System jeweils nur ein Antikörper inkubiert wird, besteht kein Grund zur Sorge hinsichtlich einer Kreuzreaktivität der Antikörper oder der Notwendigkeit, primäre und sekundäre Antikörper abzugleichen. Dadurch werden die Herausforderungen, die mit der Auswahl und Abgleichung von Antikörpern verschiedener Spezies im Versuchsdesign verbunden sind, erheblich reduziert.
Das Kit enthält spezifische Tyramin-Fluoreszenzfarbstoffe, darunter einen oder mehrere der folgenden: TYR-480Plus, TYR-520Plus, TYR-570Plus, TYR-620Plus, TYR-690Plus und TYR-780Plus. Diese Fluoreszenzfarbstoffe können einzeln oder in Kombination verwendet werden und ermöglichen eine einfache, doppelte, dreifache oder sogar noch komplexere Fluoreszenzverstärkung und homologe Antikörpermarkierung, was die Vielseitigkeit des Kits erheblich erhöht.
Unser Multi Fluorescence Staining Plus(mIHC) Kits können derzeit bis zu 9 Farben erzeugen. Die Farbstoffkombinationen sind in der folgenden Tabelle aufgeführt:
Kit-Komponenten:
TYR-***Plus Fluoreszenzfarbstoffe, TSA-Puffer, HRP-Ziege-Anti-Maus/Kaninchen-Universal-Sekundärantikörper, DAPI-Färbelösung (gebrauchsfertig), Antikörperverdünnungsmittel, 3 % Wasserstoffperoxid.
Vorteile der Multi-Fluoreszenzfärbung Plus(mIHC) Bausätze:
1.Hohe Empfindlichkeit, 10-50 mal höher als bei herkömmlichen TSA-Testkits,
2.Achten Sie darauf, dass das Signal nicht zu stark ist. Wenn das Signal zu stark ist, verringert sich die Farbstoffkonzentration/Reaktionszeit/Primärantikörperkonzentration.
3.Wenn das Signal zu schwach ist, erhöhen Sie die Farbstoffkonzentration/Reaktionszeit/Primärantikörperkonzentration.
4.Je höher die Konzentration des Multi Fluorescence Staining Plus(mIHC) Kits, desto exponentiell verstärkt sich das Signal; 1:50 kann das stärkste Signal erzielen und 1:500 entspricht dem Signal eines herkömmlichen TSA-Kits.
5.Das Multi Fluorescence Staining Plus(mIHC) Kit weist eine hohe Löschresistenz gegenüber fluoreszierenden Farbstoffen auf und muss während des gesamten Prozesses nicht dem Sonnenlicht ausgesetzt werden. Es muss während der Verwendung auch nicht in einer dunklen Umgebung betrieben werden, darf aber nicht dem Sonnenlicht ausgesetzt werden.
Operatives Färbeverfahren:
Beispiel für die Bildgebung mit unserMulti-Fluoreszenzfärbung Plus KitS:
(A) Menschliches Eileitergewebe, Index A (570 gelb) + Index B (520 grün) + Index C (690 Pulver);
(B) Mäusenierengewebe Index A (570 gelb) + Index B (520 grün) + Index C (690 Pulver);
(C) Menschlicher Magenkrebstumorindikator A (690 Pulver)+Indikator B (620 rot)+Indikator C (570 gelb)+Indikator D (520 grün); (D) Menschlicher Darmgewebeindex A (570 gelb)+Index B (520 grün)+Index C (690 rosa)+Index D (620 rot)+Index E (480 grün).
