مقدمة المبدأ:
مبدأ المناعة النسيجية المتعددة (mIHC) هو أن المستضد الموجود على أقسام الأنسجة يرتبط بشكل خاص بالجسم المضاد الأولي. ثم، تتم إضافة جسم مضاد ثانوي مقترن ببيروكسيداز الفجل (HRP) للارتباط بالجسم المضاد الأولي. بعد إضافة ركيزة فلورسنت التيرامين، نيتم تنشيط ركائز التيرامين الفلوريسين المفعلة بواسطة بيروكسيد الهيدروجين المحفز بواسطة HRP. عند إضافة ركيزة الفلوريسين، يتم تنشيط ركيزة الفلوريسين التيرامين غير النشطة تحفيزيًا بواسطة HRP في وجود بيروكسيد الهيدروجين. ترتبط الركيزة النشطة تساهميًا ببقايا البروتين القريبة، بما في ذلك التربتوفان والهيستيدين والتيروزين، مما يسمح بربط المستضد بالفلوريسين بشكل مستقر.
في تجارب الوسم المتعدد، يمكن غسل الأجسام المضادة الأولية والثانوية غير المرتبطة تساهميًا من الجولة السابقة باستخدام الإصلاح الحراري أو مذيب الأجسام المضادة. بعد ذلك، يتم تحضين الجولة التالية من الأجسام المضادة الأولية والثانوية لـ HRP، متبوعًا بتطبيق ركيزة فلوريسين تيروزين مختلفة. يمكن تكرار هذه العملية لتحقيق خطوات وسم متعددة. نظرًا لأنه يتم تحضين جسم مضاد واحد فقط في كل مرة في كل نظام، فلا يوجد قلق بشأن التفاعل المتبادل للأجسام المضادة أو الحاجة إلى مطابقة الأجسام المضادة الأولية والثانوية، مما يقلل بشكل كبير من التحديات المرتبطة باختيار ومطابقة الأجسام المضادة من أنواع مختلفة في التصميم التجريبي.
تحتوي المجموعة على أصباغ فلورية تيرامينية محددة، والتي تتضمن واحدة أو أكثر من المواد التالية: TYR-480Plus، وTYR-520Plus، وTYR-570Plus، وTYR-620Plus، وTYR-690Plus، وTYR-780Plus. يمكن استخدام هذه الأصباغ الفلورية بشكل فردي أو مجتمعة، مما يسمح بتضخيم الفلورسنت بشكل فردي أو مزدوج أو ثلاثي أو حتى أكثر تعقيدًا ووضع علامات على الأجسام المضادة المتجانسة، مما يعزز بشكل كبير من تنوع المجموعة.
ملكنا يمكن لمجموعات التلوين متعدد الفلورسنت (mIHC) حاليًا تحقيق ما يصل إلى 9 ألوان. يتم تفصيل مجموعات الصبغة في الجدول أدناه:
مكونات الطقم:
صبغات فلورية من TYR-***Plus، محلول TSA، جسم مضاد ثانوي عالمي مضاد للفئران/الأرانب من نوع HRP، محلول تلوين DAPI (جاهز للاستخدام)، مخفف الأجسام المضادة، بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 3%.
مزايا صبغة الفلورسنت المتعددة بلس(م إ إه) مجموعات:
1.حساسية عالية، أعلى بمقدار 10 إلى 50 مرة من مجموعات اختبار TSA التقليدية،
2.احرص على عدم الحصول على إشارة قوية للغاية؛ فإذا كانت الإشارة قوية للغاية، فسوف ينخفض تركيز الصبغة/وقت التفاعل/تركيز الأجسام المضادة الأولية،
3.إذا كانت الإشارة منخفضة للغاية، قم بزيادة تركيز الصبغة/زمن التفاعل/تركيز الأجسام المضادة الأولية؛
4.كلما زاد تركيز مجموعات التلوين متعدد الفلورسنت بلس (mIHC)، تم تعزيز الإشارة بشكل كبير؛ يمكن الحصول على أقوى إشارة بنسبة 1: 50، وتعادل نسبة 1: 500 إشارة مجموعة TSA التقليدية.
5.تتميز مجموعة التلوين متعدد الفلورسنت (mIHC) بمقاومة قوية للتبريد بسبب الصبغات الفلورية، ولا تتطلب التعرض لأشعة الشمس طوال العملية بأكملها. كما أنها لا تتطلب التشغيل في بيئة مظلمة أثناء الاستخدام، ولكن لا يمكن تعريضها لأشعة الشمس.
إجراء التلوين الجراحي:
مثال على التصوير باستخدام ملكنامجموعة التلوين متعدد الفلورسنتس:
(أ) مؤشر أنسجة قناة فالوب البشرية أ (570 أصفر) + المؤشر ب (520 أخضر) + المؤشر ج (690 مسحوق)؛
(ب) مؤشر أنسجة الكلى لدى الفأر أ (570 أصفر) + المؤشر ب (520 أخضر) + المؤشر ج (690 مسحوق)؛
(ج) مؤشر ورم سرطان المعدة البشري أ (690 مسحوق) + المؤشر ب (620 أحمر) + المؤشر ج (570 أصفر) + المؤشر د (520 أخضر)؛ (د) مؤشر الأنسجة المعوية البشرية أ (570 أصفر) + المؤشر ب (520 أخضر) + المؤشر ج (690 وردي) + المؤشر د (620 أحمر) + المؤشر هـ (480 أخضر).
